固相萃取装置的核心操作围绕填料展开，填料的类型决定了萃取机理，进而导致操作步骤的关键差异。常见固相萃取填料主要分为反相、正相、离子交换三大类，此外还有吸附型等特殊填料，各类填料的操作步骤在活化、上样、淋洗、洗脱四个核心环节均有明显区别，直接影响萃取效率和分离效果，以下详细解析其操作差异。
反相填料以C18、C8等非极性填料为代表，主要通过疏水作用保留非极性至中等极性目标物，操作步骤侧重“极性梯度调控”。活化环节需先用甲醇等水溶性有机溶剂冲洗填料，去除杂质并激活疏水位点，再用水平衡，确保填料处于水合状态，避免上样时目标物吸附不完全，全程需防止填料干涸。上样时需控制流速在1ml/min左右，样品需用极性溶剂溶解，确保目标物与填料充分作用。淋洗选用含0-50%极性溶剂的缓冲溶液，去除弱吸附的干扰杂质，淋洗后需将小柱抽干。洗脱则用非极性或低极性溶剂，通过破坏疏水作用将目标物洗脱，流速需保持平缓以提高回收率。
正相填料如硅胶、Florisil等，极性较强，依靠极性作用保留中等至强极性目标物，操作步骤核心是“非极性体系维持”。活化环节无需水平衡，直接用正己烷、二氯甲烷等非极性有机溶剂冲洗，去除填料中的极性杂质，建立非极性吸附环境。上样时样品需用非极性溶剂溶解，避免极性溶剂破坏填料的吸附位点。淋洗采用极性略强于活化溶剂的非极性试剂，选择性去除干扰物，无需抽干小柱。洗脱则用极性更强的溶剂，逐步破坏目标物与填料的极性作用，实现目标物的高效收集，溶剂洗脱强度需循序渐进。
离子交换填料分为阳离子交换（SCX）和阴离子交换（SAX）两类，通过离子交换作用保留带电目标物，操作步骤重点是“pH值与离子强度控制”。活化环节需根据样品溶剂调整，极性溶剂体系下，先用水溶性有机溶剂活化，再用水平衡，最后用特定pH值的缓冲溶液平衡，确保填料完全离子化。上样时需严格控制样品pH值，阳离子目标物需使pH值低于其pKa值两个单位，阴离子目标物则需高于其pKa值两个单位，保证目标物带电并与填料结合。淋洗用弱缓冲溶液，维持离子强度稳定，去除未结合的中性干扰物。洗脱通过调节pH值或提高离子强度，中和目标物电荷，破坏离子交换作用，实现洗脱。
此外，吸附型填料如活性炭、石墨化碳等，操作步骤相对简化，活化用样品溶剂即可，上样时目标物直接被物理吸附，淋洗选用对干扰物溶解度高的试剂，洗脱则用能破坏物理吸附的强洗脱剂。各类填料操作的核心差异源于其作用机理，掌握这些差异，才能精准调控操作步骤，避免出现填料失效、目标物流失等问题，充分发挥固相萃取装置的分离净化作用。
