基于 CNW 黄曲霉毒素 B1 免疫亲和柱 SBEQ-CC15001 的食用油检测前处理应用方案
上海仪器网 / 2025-10-09
一、方案背景与设备优势
食用油（如花生油、玉米油、葵花籽油等）在生产、储存过程中易受黄曲霉污染，产生黄曲霉毒素 B1（AFB1）。AFB1 具有强毒性与致癌性，是食用油安全检测的关键指标（国家食品安全标准 GB 2716-2018 规定食用油中 AFB1 含量≤5.0μg/kg）。传统检测前处理方法（如液 - 液萃取、固相萃取）存在净化效率低、杂质残留多、操作复杂等问题，易干扰后续仪器检测（如 HPLC、LC-MS/MS）结果。
CNW SBEQ-CC15001 黄曲霉毒素 B1 免疫亲和柱凭借高特异性免疫吸附技术，可高效解决食用油前处理痛点，核心优势显著：其一，特异性强，柱内抗体仅与 AFB1 特异性结合，对食用油中的油脂、色素、脂肪酸等杂质无吸附，净化效果优异；其二，富集效率高，对 AFB1 的回收率稳定在 85%-110%，且检测限低至 0.1μg/kg，满足痕量检测需求；其三，操作便捷，无需复杂前处理设备，仅需简单离心、过柱步骤即可完成净化，单个样本前处理时间缩短至 30 分钟以内；其四，兼容性广，适配多种食用油基质（包括压榨油、浸出油、调和油），且可与 HPLC、LC-MS/MS 等主流检测仪器无缝衔接。
二、适用范围与检测目标
本方案适用于花生油、玉米油、大豆油、葵花籽油、橄榄油等常见食用油中黄曲霉毒素 B1 的检测前处理，尤其适用于油脂含量高、杂质复杂的压榨类食用油。检测目标为通过免疫亲和柱净化，去除食用油中的油脂、色素、蛋白质等干扰杂质，富集 AFB1，得到纯净的待测液，为后续仪器检测提供高质量样本，确保检测结果的准确性与重复性（相对标准偏差 RSD≤5%）。
三、详细操作流程
（一）实验前准备
- 试剂与耗材准备：准备 CNW SBEQ-CC15001 免疫亲和柱（需在 2-8℃冷藏保存，使用前取出回温至室温）、正己烷（分析纯）、甲醇（色谱纯）、磷酸二氢钾（分析纯）、超纯水（电阻率≥18.2MΩ・cm）、0.22μm 有机相滤膜。配置磷酸盐缓冲液（PBS）：称取 0.2g 磷酸二氢钾，加入 100mL 超纯水溶解，用磷酸调节 pH 至 7.0，摇匀后备用；配置甲醇 - 水洗脱液（80:20，v/v）：量取 80mL 甲醇与 20mL 超纯水混合，摇匀后备用。
- 仪器与容器准备：准备离心机（转速≥5000r/min）、固相萃取装置（带负压调节功能）、10mL 移液管、50mL 离心管、10mL 收集管、玻璃漏斗。将离心管、收集管置于 121℃高压灭菌 20 分钟，冷却后备用；检查固相萃取装置密封性，确保无漏气，将免疫亲和柱固定在装置支架上，备用。
- 样本准备：选取具有代表性的食用油样本（如从不同批次、不同储存位置取样，混合均匀），量取 10mL 样本置于 50mL 离心管中，加入 20mL 正己烷，用移液管轻轻搅拌 1 分钟，使样本充分溶解，避免剧烈搅拌产生气泡。若样本中存在固体杂质（如压榨油中的残渣），需先通过玻璃漏斗过滤，去除杂质后再进行后续操作。
（二）前处理操作步骤
- 样本提取：向装有食用油 - 正己烷混合液的离心管中，加入 10mL PBS 缓冲液，盖紧管盖，颠倒离心管 10 次（每次颠倒后停留 2 秒），确保两相充分混合，然后将离心管放入离心机，设定转速 5000r/min，离心 10 分钟，使混合液分层（上层为正己烷 - 油相，下层为 PBS - 水相）。离心完成后，用移液管缓慢吸取下层水相（避免吸入上层油相），转移至另一干净的 50mL 离心管中，若水相浑浊，可再次离心 5 分钟，直至水相澄清。
- 免疫亲和柱净化：打开固相萃取装置负压开关，调节负压至 0.02-0.03MPa（确保液体流速稳定）。用 5mL 超纯水缓慢冲洗免疫亲和柱（流速 1-2 滴 / 秒），活化柱内抗体，待柱内液体流尽后，关闭负压。将提取后的水相样本缓慢注入免疫亲和柱（流速 1 滴 / 秒），使样本中的 AFB1 与柱内抗体充分结合，待样本全部流入柱内后，用 10mL 超纯水分两次冲洗柱子（每次 5mL，流速 2 滴 / 秒），去除柱内残留的杂质与油脂，冲洗完成后，保持负压状态 30 秒，排空柱内残留液体。
- 目标物洗脱：关闭固相萃取装置负压，将干净的 10mL 收集管置于免疫亲和柱下方，用 3mL 甲醇 - 水洗脱液缓慢注入柱子（流速 1 滴 / 秒），待洗脱液全部流入柱内后，停留 1 分钟，确保 AFB1 完全从抗体上解离，然后打开负压，调节负压至 0.01-0.02MPa，使洗脱液缓慢流入收集管。洗脱完成后，用 1mL 超纯水冲洗柱子，将冲洗液合并至收集管中，得到 AFB1 待测液。
- 待测液处理：将收集管中的待测液用 0.22μm 有机相滤膜过滤，去除微小杂质与颗粒，避免堵塞检测仪器色谱柱。过滤后的待测液转移至进样瓶中，标注样本编号、处理日期及操作人员，若不立即检测，需将待测液置于 2-8℃冷藏保存，保存时间不超过 24 小时。
（三）操作后处理
- 耗材处理：使用过的免疫亲和柱、离心管、移液管等耗材，需放入专用医疗废物袋中，进行高温灭菌处理（121℃，30 分钟）后，再按有害废物规范处置，避免 AFB1 残留造成环境污染。
- 仪器清洁：用甲醇擦拭固相萃取装置支架与管路，去除残留的样本与试剂，然后用超纯水冲洗管路 3 次，晾干后备用；离心机转子用 75% 乙醇溶液消毒，避免交叉污染；移液管、收集管等玻璃器皿用铬酸洗液浸泡 2 小时，再用超纯水冲洗至中性，晾干后存放。
- 记录与追溯：在实验记录本中详细记录操作信息，包括样本名称、批次、处理体积、试剂用量、离心参数、洗脱体积、待测液保存条件及操作过程中出现的异常情况（如柱堵塞、洗脱液浑浊等），便于后续检测结果追溯与问题排查。
四、方案优势与注意事项
（一）方案优势
- 净化效果优异：免疫亲和柱特异性吸附 AFB1，可有效去除食用油中的油脂、色素等杂质，经净化后的待测液澄清透明，无杂质干扰，后续 HPLC 检测时基线平稳，峰形对称，检测结果准确性高。
- 操作高效便捷：相较于传统前处理方法，本方案步骤简化，单个样本处理时间仅需 30 分钟，且无需复杂仪器，普通实验室即可开展操作，大幅提升检测效率，适合批量样本处理（如每日处理 50-100 个样本）。
- 回收率稳定：AFB1 回收率稳定在 85%-110%，符合国家检测标准要求（GB/T 5009.22-2016），且重复性好（RSD≤5%），确保不同操作人员、不同时间检测结果的一致性。
（二）注意事项
- 试剂与耗材规范使用：甲醇、正己烷等试剂需使用指定纯度级别，避免试剂杂质影响净化效果；免疫亲和柱需严格按照储存条件保存，过期或变质的柱子禁止使用；滤膜需选择有机相类型，避免使用水相滤膜导致待测液污染。
- 流速控制关键：样本上柱、冲洗、洗脱过程中需严格控制流速（1-2 滴 / 秒），流速过快会导致 AFB1 与抗体结合不充分或洗脱不完全，降低回收率；流速过慢则会延长处理时间，影响效率。可通过固相萃取装置负压精准调节流速，确保流速稳定。
- 避免交叉污染：不同样本处理时需更换离心管、收集管及移液管吸头，免疫亲和柱为一次性使用，禁止重复使用；操作过程中需佩戴一次性手套、口罩，避免手部接触样本与试剂，防止交叉污染。
- 异常情况处理：若样本上柱时出现堵塞，需降低负压，缓慢推动样本，若仍无法解决，需重新提取样本；若洗脱液浑浊，需重新过滤待测液，避免杂质进入检测仪器；若回收率低于 85%，需检查免疫亲和柱是否过期、试剂是否变质或操作步骤是否有误，排除问题后重新处理样本。
五、应用场景拓展
本方案不仅适用于实验室常规食用油检测前处理，还可拓展至食品监管、食用油生产企业自检等场景。例如，在食品药品监管部门开展的食用油质量抽检中，可快速处理大量样本，为执法提供及时、准确的检测数据；在食用油生产企业，可将本方案融入生产过程质量控制，对原料（如花生、大豆）及成品进行 AFB1 检测，从源头把控产品安全。通过标准化的前处理流程与免疫亲和柱的稳定性能，CNW SBEQ-CC15001 免疫亲和柱可为食用油中黄曲霉毒素 B1 检测提供可靠技术支撑，保障食用油消费安全。
