上海安亭 TLXJ-IIB 低速大容量离心机在生物样品（全血）红细胞分离中的应用方案
上海仪器网 / 2025-09-30
一、方案背景与目的
在临床检验、血液学研究等领域，全血中红细胞分离是获取血浆、白细胞等组分的关键步骤。上海安亭 TLXJ-IIB 低速大容量离心机具备最高 6000r/min 转速、最大 500mL 离心杯容量及室温～40℃可调温控功能，可通过低速离心的密度差异实现红细胞与其他血液组分的温和分离，避免高速离心对细胞造成损伤。本方案旨在通过标准化操作，利用该设备高效分离全血中的红细胞，获得高纯度、高活性的红细胞沉淀与上层血浆，为后续血型鉴定、血红蛋白检测等实验提供优质样品。
二、实验原理
全血由红细胞（密度 1.090g/cm³）、白细胞（密度 1.075g/cm³）、血小板（密度 1.030g/cm³）及血浆（密度 1.025g/cm³）组成，各组分密度差异明显。上海安亭 TLXJ-IIB 低速大容量离心机通过设定适宜的转速（3000-4000r/min）与离心时间（10-15min），产生温和的离心力，使密度较大的红细胞逐渐沉降至离心管底部形成沉淀；白细胞与血小板形成中间薄层（ Buffy coat ）；血浆则漂浮于上层，从而实现各组分的分层分离，且低速条件可最大程度保留红细胞的完整性与活性。
三、实验材料与设备
1. 实验材料
- 生物样品：新鲜全血（采集后 4h 内使用，含 EDTA-K2 抗凝剂，每 10mL 全血加 100μL 抗凝剂）；
- 试剂：无菌生理盐水（0.85% NaCl，用于红细胞洗涤）、pH7.4 磷酸盐缓冲液（PBS，用于后续细胞活性检测）；
- 耗材：50mL 无菌离心管（适配 TLXJ-IIB 离心机转子）、无菌移液管（10mL/20mL）、无菌吸头、血细胞计数板、盖玻片。
2. 核心设备
- 上海安亭 TLXJ-IIB 低速大容量离心机（配备 50mL×8 角转子，提前校准转速与温度）；
- 超净工作台（保障无菌操作环境）、生物安全柜（处理全血样品时使用）、光学显微镜（红细胞活性观察）、电子天平（离心管平衡称重）。
四、实验操作流程
1. 离心机预热与参数设定
- 打开 TLXJ-IIB 离心机电源，设定温度为 25℃（室温分离，若需低温保护可设为 4℃），转速 3500r/min，离心时间 12min，启动预热程序，待温度稳定后备用；
- 检查离心机转子是否安装牢固，离心腔内部有无异物，确保设备处于正常状态。
2. 全血样品准备与离心管平衡
- 在生物安全柜中，将新鲜全血轻轻颠倒混匀（避免剧烈振荡导致红细胞破裂），按每管 20mL 的量分装至 50mL 无菌离心管中；
- 用电子天平对分装后的离心管进行两两平衡，若重量差异超过 0.1g，用无菌生理盐水微调至平衡，防止离心时转子偏移产生安全隐患。
3. 离心分离操作
- 将平衡后的离心管对称放入 TLXJ-IIB 离心机的角转子中，确保离心管紧贴转子内壁，盖紧离心机盖；
- 确认参数无误后，按下 “启动” 键，设备按设定程序运行，离心过程中密切观察设备运行状态，若出现异常震动或噪音，立即按下 “急停” 键，排查问题后重新操作；
- 离心结束后，待转子完全停止转动（转速显示为 0），打开离心机盖，缓慢取出离心管，此时可见管内样品分层：底部为深红色红细胞沉淀（约占全血体积的 40%-50%），中间为乳白色薄层（白细胞与血小板），上层为淡黄色血浆。
4. 红细胞收集与洗涤
- 在超净工作台中，用无菌移液管缓慢吸取上层血浆（避免触碰中间薄层），转移至新的离心管中备用；
- 向剩余的红细胞沉淀中加入 20mL 无菌生理盐水，轻轻吹打混匀，制成红细胞悬液；
- 按照步骤 2-3 的方法，再次用 TLXJ-IIB 离心机以 3000r/min 转速离心 10min，弃去上层洗涤液，重复洗涤 2 次，去除残留的血浆蛋白与抗凝剂，获得纯化的红细胞沉淀。
五、关键注意事项
- 转速与时间控制：转速不可过高（超过 4000r/min 易导致红细胞破裂），离心时间不可过长（超过 15min 会增加白细胞污染风险），需严格遵循 3500r/min、12min 的标准参数；
- 无菌操作要求：全血样品处理全程需在生物安全柜或超净工作台中进行，离心管、移液管等耗材需提前灭菌，避免样品污染；
- 离心管平衡：离心管平衡误差必须控制在 0.1g 以内，TLXJ-IIB 离心机虽具备一定的平衡容错能力，但失衡会缩短转子使用寿命，甚至引发设备故障；
- 样品时效性：全血样品需在采集后 4h 内完成分离，超过时间易导致红细胞活性下降，影响后续实验结果。
六、结果验证与分析
- 纯度验证：取 10μL 纯化后的红细胞沉淀，用 PBS 稀释后滴加至血细胞计数板，在光学显微镜下观察，若视野中仅见红细胞（呈双凹圆盘状），无明显白细胞或杂质，说明纯度达标（红细胞纯度≥98%）；
- 活性验证：取少量红细胞悬液，加入 0.1% 台盼蓝染液染色，显微镜下观察，若蓝色死细胞比例低于 5%，表明红细胞活性良好；
- 回收率计算：通过离心前后红细胞体积对比，计算回收率，TLXJ-IIB 离心机分离的红细胞回收率通常可达 90% 以上，若回收率低于 80%，需检查离心参数或样品处理过程是否存在问题。
