基于雷弗 TFD02-01 的酶联免疫实验（ELISA）试剂定量添加应用方案
上海仪器网 / 2025-09-17
酶联免疫实验（ELISA）是临床诊断、食品安全检测中常用的微量分析技术，其核心步骤（抗原包被、抗体孵育、酶标试剂反应、底物显色）均需精准控制试剂添加量（通常为 50-200μL）。手动移液器添加易因操作人员手部抖动、剂量判断误差导致试剂用量偏差，进而影响吸光度检测结果的重复性与准确性。雷弗 TFD02-01 分体注射泵凭借 “μL 级精准控量、分体式结构适配微孔板、可编程多模式输送” 的优势，成为 ELISA 实验试剂定量添加的标准化设备，以下为具体应用方案。
一、仪器与 ELISA 实验需求的适配性
ELISA 实验对试剂添加的 “精度”“稳定性”“兼容性” 要求严苛，雷弗 TFD02-01 的核心优势恰好契合场景需求：其一，流量精度达 ±0.5%（RSD），最小输送体积可至 1μL，完全满足 ELISA 实验中酶标抗体（如 100μL / 孔）、底物溶液（如 50μL / 孔）的微量定量需求，避免因剂量偏差导致的 “假阳性”“假阴性” 结果；其二，采用 “控制器 + 执行单元” 分体设计 —— 控制器可放置在实验台外侧，执行单元（注射泵本体）通过支架固定在微孔板上方，减少操作人员接触微孔板时的干扰，同时适配 96 孔、384 孔等不同规格微孔板（通过调整执行单元高度与移动轨迹实现）；其三，支持 “单次定量”“连续滴加”“梯度输送” 三种模式，可分别匹配 ELISA 不同步骤的试剂添加需求（如抗原包被用 “单次定量”，底物显色用 “连续滴加”），且具备掉电记忆功能，可保存 10 组实验参数，避免重复设置。
二、完整操作流程
（一）前期准备
- 试剂与耗材适配：根据 ELISA 实验需求选择注射器（雷弗 TFD02-01 兼容 100μL-10mL 规格注射器，建议酶标试剂用 1mL 注射器，底物溶液用 500μL 注射器），将注射器与专用软管、针头（选用 25G 微量针头，避免试剂挂壁）组装，确保接口无漏液；同时准备待添加试剂（如辣根过氧化物酶标记抗体、TMB 底物溶液），提前平衡至室温（25℃±2℃，避免温度波动影响试剂活性）。
- 仪器调试与参数设定：接通控制器与执行单元电源（DC24V），通过控制器触摸屏进行参数设置 ——①选择 “单次定量” 模式（适用于抗原、抗体添加），设定 “目标体积” 为 100μL（根据实验方案调整）、“推注速度” 为 5μL/s（速度过快易产生气泡，过慢影响效率）；②若为底物溶液添加，选择 “连续滴加” 模式，设定 “每孔体积” 50μL、“孔间间隔时间” 2s（匹配微孔板移动速度）；③通过 “校准功能” 进行体积校准（用电子天平称量注射器推出的去离子水重量，换算体积后修正仪器参数，确保精度）。
- 设备安装与定位：将执行单元通过十字支架固定在微孔板孵育器上方，调整针头高度（距微孔板表面 5mm，避免触碰孔壁导致交叉污染），并通过控制器的 “手动移动” 功能，将针头对准微孔板第一列第一孔，完成初始定位。
（二）试剂添加操作
- 抗原包被阶段：抽取 10mL 抗原溶液注入注射器，启动 “单次定量” 模式，仪器自动推注 100μL 抗原溶液至每孔，完成一列后执行单元自动移动至下一列（移动精度 ±0.1mm），全程无需人工干预；若需更换试剂（如从抗原切换为封闭液），按下 “暂停” 键，更换注射器后重启，仪器自动延续未完成的添加流程。
- 酶标抗体添加阶段：由于酶标抗体价格昂贵且需避免污染，需先通过 “排空功能” 排出注射器内气泡（防止空气进入微孔板），再抽取 5mL 酶标抗体溶液；启动预设的 “梯度输送” 模式（若实验需测试不同抗体浓度，可设定 50μL、100μL、150μL 三档体积），仪器按设定梯度完成多组实验的试剂添加，同时自动记录每孔添加量（数据可通过 USB 导出至电脑）。
- 底物显色阶段：底物溶液需避光且快速添加（避免提前显色），选择 “连续滴加” 模式并开启 “避光罩”（部分执行单元可选配），仪器以 2s / 孔的速度完成 96 孔底物添加（全程仅需 3 分钟，较手动添加效率提升 4 倍），添加结束后自动提示，便于操作人员及时将微孔板转移至酶标仪检测。
三、关键控制要点
- 气泡排除：每次更换试剂或注射器后，必须执行 “排空” 操作 —— 设定 “排空体积” 为 50μL，仪器快速推注排除针头与软管内的气泡，若仍有气泡，需拆下注射器手动弹击管壁排气，避免气泡占据体积导致实际添加量不足。
- 交叉污染防控：不同试剂添加后需更换针头与软管（或用去离子水冲洗 3 次，再用无水乙醇冲洗 1 次，烘干后复用）；微孔板定位时需确保针头正对孔中心，禁止触碰孔壁（若针头沾染孔内液体，需用无尘纸擦拭后再进行下一列添加）。
- 速度适配：根据试剂粘度调整推注速度 —— 低粘度试剂（如封闭液、洗涤液）可设为 8μL/s，高粘度试剂（如酶标抗体、浓缩底物）需降至 3μL/s，防止因速度过快导致试剂飞溅出孔或产生气泡。
四、应用价值与场景
在临床诊断实验室，该方案可提升新冠抗体检测、肿瘤标志物检测（如 CEA、AFP）的 ELISA 实验重复性（RSD 从手动添加的 5%-8% 降至 1%-2%），减少误诊风险；在食品安全检测领域（如三聚氰胺、农药残留检测），48 小时内可完成 50 组 ELISA 实验的试剂添加，较手动操作效率提升 3 倍，满足批量检测需求；在科研场景中，可编程的参数设置可支持多变量 ELISA 实验（如不同试剂浓度组合测试），为实验数据的可靠性提供保障。
综上，雷弗 TFD02-01 分体注射泵通过精准、高效、灵活的试剂定量添加能力，解决了 ELISA 实验中手动操作的痛点，为微量分析实验的标准化、自动化提供了可靠支撑。
