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参数项
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优化方案
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传统离心柱法对照
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|---|---|---|
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样品来源
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临床咽拭子样品60份（阳性20份、阴性40份，病毒载量10²-10⁶ copies/mL）
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同批次平行样品
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最优提取参数
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裂解温度65℃、裂解时间10min，磁珠用量20μL，洗脱体积50μL，热盖温度105℃
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按试剂盒说明书操作（裂解30min，洗脱50μL）
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验证指标
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核酸浓度（Nanodrop 2000）、PCR扩增Ct值、阳性检出率、重复性（n=6）
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同左侧验证指标
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样品类型
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提取方法
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平均核酸浓度（ng/μL）
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平均Ct值
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阳性检出率（%）
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RSD（%）
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单次提取时间（min）
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|---|---|---|---|---|---|---|
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高载量阳性样品（10⁵-10⁶ copies/mL）
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TNE-9600Plus
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1.82±0.04
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23.56±0.32
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100
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1.23
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32
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高载量阳性样品（10⁵-10⁶ copies/mL）
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离心柱法
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1.48±0.06
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25.12±0.45
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100
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2.15
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120
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低载量阳性样品（10²-10³ copies/mL）
|
TNE-9600Plus
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0.35±0.01
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34.28±0.51
|
100
|
2.28
|
32
|
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低载量阳性样品（10²-10³ copies/mL）
|
离心柱法
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0.28±0.02
|
37.85±0.63
|
85
|
3.89
|
120
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阴性样品
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TNE-9600Plus
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0.08±0.01
|
无扩增
|
0
|
-
|
32
|
|
阴性样品
|
离心柱法
|
0.09±0.02
|
无扩增
|
0
|
-
|
120
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参数项
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鸡肉样品
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牛奶样品
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|---|---|---|
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样品处理
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均质后取25g样品，加入225mL缓冲液增菌6小时，取1mL增菌液用于提取
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取10mL样品，加入90mL缓冲液增菌6小时，取1mL增菌液用于提取
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最优提取参数
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裂解温度75℃、裂解时间12min，磁珠用量25μL，洗脱体积60μL
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裂解温度70℃、裂解时间10min，磁珠用量20μL，洗脱体积60μL
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国标对比方法
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GB 4789.42-2020增菌培养法（24小时增菌+生化鉴定）
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同鸡肉方法
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灵敏度验证
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人工污染沙门氏菌（10¹-10⁴ CFU/g），计算检出限
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人工污染沙门氏菌（10¹-10⁴ CFU/mL），计算检出限
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样品类型
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污染浓度（CFU/g/mL）
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TNE-9600Plus检出率（%）
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国标方法检出率（%）
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平均提取浓度（ng/μL）
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RSD（%）
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总检测时间（h）
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|---|---|---|---|---|---|---|
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鸡肉
|
10⁴
|
100
|
100
|
2.15±0.05
|
1.42
|
7.5
|
|
鸡肉
|
10²
|
100
|
100
|
0.42±0.02
|
2.08
|
7.5
|
|
鸡肉
|
10¹
|
90
|
85
|
0.11±0.01
|
2.27
|
7.5
|
|
牛奶
|
10⁴
|
100
|
100
|
1.98±0.04
|
1.31
|
7.2
|
|
牛奶
|
10²
|
100
|
100
|
0.38±0.01
|
1.84
|
7.2
|
|
牛奶
|
10¹
|
92
|
88
|
0.10±0.01
|
2.15
|
7.2
|
